凝血功能紊乱是COVID-19致病性的主要因素，但关于细胞外囊泡（EVs）和残留细胞（RCs）参与的研究数据有限。使用Apogeeflow 纳米流式仪分析EVs中CD61、CD235a、CD45和CD31的含量，分别用于检测血小板、红细胞、白细胞或内皮细胞，而磷脂酰丝氨酸EVs/RCs则通过乳酸粘附素的结合表示促凝剂催化。忽略细胞来源D-二聚体增加的患者表现出最高的RCs和sEVs数量。血小板活化，反映在CD61+和乳酸粘附素+ mEV和RCs水平升高，与凝血障碍有关。低D -二聚体患者可以通过CD41a + sEVs的四跨蛋白特征与对照组区分开来，这表明循环血小板sEVs亚群的变化可能在COVID感染期间具有一定预后价值。

研究背景与目的:

严重的COVID-19感染会引起频繁的凝血和止血障碍，几种COVID-19感染的常见实验室结果包括血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平高、白细胞增多伴淋巴细胞减少、血小板增多和贫血。关于COVID-19应答对细胞介导的止血的影响的数据有限。血小板还通过膜受体直接与病原体相互作用，参与免疫反应。活化的血小板释放异质的细胞外囊泡（EVs），被认为介导炎症和凝血。血小板源性EVs在多种炎症条件下增加，包括自身免疫性疾病，以及癌症和病毒感染。与COVID -19阴性患者相比，住院的COVID-19患者中血小板衍生抗体的数量也有所增加。

Apogee Flow纳米流式细胞仪的应用：EVs分析中的重要工具

Apogee Flow纳米流式细胞仪是一种先进的细胞分析技术，特别适用于微小颗粒和细胞外囊泡的检测。该仪器结合了高灵敏度的散射光和荧光检测系统，以及精确的流体控制系统，能够提供高分辨率的颗粒分析和细胞分型能力。

仪器在EVs检测应用：Apogee Flow纳米流式细胞仪在EVs检测中具有显著优势。它能够准确区分不同大小和类型的EVs，包括外泌体、微泡等，同时提供关于EVs表面标记物、内部成分和生物活性的详细信息。这使得Apogeeflow成为研究EVs在COVID-19感染的重要工具。

检测精度与优势:Apogee Flow纳米流式细胞仪在EVs检测中的精度和优势主要体现在以下几个方面：首先，它能够检测到低至纳米级的颗粒，满足对微小EVs的检测需求；其次，它能够提供多参数分析，同时检测EVs的大小、形状、表面标记物和内部成分；最后，它具有高通量检测能力，能够快速处理大量样本，提高研究效率。

实验结果：

利用流式细胞术分析EV的过程如图1所示。实验细节包括抗体克隆、代表性散点图和门控策略。将20微升血浆稀释，然后用2-2.5µl以下抗体在室温下黑暗孵育2小时：藻红蛋白（PE）偶联CD31、异硫氰酸荧光素（FITC）偶联CD45、PE偶联CD61和FITC偶联CD235a，或用3.15µl FITC偶联乳粘附素。所有样本都在A50-Micro（Apogee Flow Systems ）上进行测量，计数率保持在1000到4000之间(图1)。

图1.采用高灵敏度流式细胞仪（hsFCM）进行分离分别表征EVs。

实验结果显示，在Apogee Flow分析中，与低D-二聚体组和对照组相比，高D-二聚体组CD61、CD235、CD31、CD45和乳酸粘附素的lEVs/RCs阳性均升高（图2）。

图2. 高灵敏度流式细胞术检测残余细胞/大细胞外囊泡（1000-4000 nm）和中等细胞外囊泡（200-1000 nm）。

结论：Apogee Flow纳米流式细胞仪在COVID-19研究中具有重要作用。它能够检测和分析血小板微粒的数量和活性变化，从而揭示血小板在COVID-19病理过程中的作用。此外，它还能够检测其他细胞外囊泡和病毒颗粒，为研究COVID-19的病毒感染机制和免疫反应提供重要信息。该仪器的高灵敏度和高分辨率使得它能够准确区分和计数不同大小的颗粒，为疾病的早期诊断和预后评估提供有力支持。

原文：Increased circulating platelet-derived extracellular vesicles in severeCOVID-19 disease

Apogee Flow纳米流式细胞仪的优势

Apogee Flow纳米流式细胞仪作为流式细胞术的一种高级形式，具有更高的灵敏度和分辨率，能够检测更小的颗粒和更复杂的细胞结构。它在细胞生物学、免疫学、病毒学等领域有广泛应用，为研究细胞的功能、相互作用和疾病机制提供了重要手段。

英国Apogee超灵敏纳米流式分析仪，专为外泌体微囊泡（EVs）等小颗粒分析优化设计，在EVs样品颗粒大小分析，绝对定量，多标记物同时快速分析工作中广泛应用。截止目前，该设备已累计参与数百篇高质量同行审议文章相关实验分析工作。其出色的灵敏度，稳定性及可靠性已备受业内广泛认可，并将继续为EVs相关基础研究及转化应用提供坚实支持。

Apogee纳米流式除了可用于纳米级别的颗粒 （如：细胞外囊泡、外泌体、微生物、病毒颗粒、LNP） 等，还可以用于作常规动物细胞检测 （如免疫细胞、哺乳类动物细胞、等）。它是一台全面且功能强大的纳米流式分析仪！

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