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    如何用ARENA系统测定左旋咪唑毒性

    左旋咪唑是一种合成驱虫药,广泛应用于兽医学中,用于治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为一种驱虫药,它以线虫乙酰胆碱离子通道受体为靶点(Martin等)。除了医学应用外,左旋咪唑还广泛应用于各个研究领域,特别是秀丽隐杆线虫麻痹实验。它能诱导这些线虫瘫痪,这对于研究神经元功能和肌肉生理学来说是无价的。为了深入了解毒理学实验,我们在下面举一个利用这种化合物的例子。研究人员可以利用这个例子作为一个框架,使用不同的可溶性药物进行他们自己的毒性研究。


    材料:
    带盖6孔板,NGM培养基,M9缓冲液,左旋咪唑-原液:100mM水溶,同步成虫种群,WMicrotracker Arena设备。


    简易操作:


    微孔板制备:

    • 按照标准程序制备NGM;

    • 在加入盐和胆固醇后将左旋咪唑立即加入55°C的NGM琼脂溶液中;

    • 左旋咪唑片未接种OP50中;

    • 制备后两周内可使用,保存在4°C的容器中;

    • 测定是在实验开始前已将模板降到室温的板上进行的。


    Protocol步骤:

    1,在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50);
    2,用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,转移到15毫升无菌试管中;
    3,让虫子静下来。倒入上清液,注意不要扰乱颗粒;
    4,用5ml M9缓冲液进行清洗。短暂摇动或翻转管子;
    5,重复上述步骤。倒出上清,加入3ml M9缓冲液;
    6,数一式三份,计数每10ul中虫数,计算平均值;
    7,制备悬浮液,得到[35虫/10μl];
    8,将10 μl虫液转移至6孔板;
    9,使用wMicroTracker ARENA观察蠕虫活动;

    备注:至少进行3次技术重复,至少进行2次生物重复。


    实验结果如图所示:


    左旋咪唑对N2运动活性的剂量抑制反应曲线

    评价不同浓度左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔挑选35个年轻成虫N2。在23℃下记录4小时的运动活动。数据代表四个独立实验的平均值,进行重复实验。

     

     

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