如何用ARENA系统测定左旋咪唑毒性
左旋咪唑是一种合成驱虫药,广泛应用于兽医学中,用于治疗由线虫引起的寄生虫感染。作为一种驱虫药,它以线虫乙酰胆碱离子通道受体为靶点(Martin等)。除了医学应用外,左旋咪唑还广泛应用于各个研究领域,特别是秀丽隐杆线虫麻痹实验。它能诱导这些线虫瘫痪,这对于研究神经元功能和肌肉生理学来说是无价的。为了深入了解毒理学实验,我们在下面举一个利用这种化合物的例子。研究人员可以利用这个例子作为一个框架,使用不同的可溶性药物进行他们自己的毒性研究。
材料:
带盖6孔板,NGM培养基,M9缓冲液,左旋咪唑-原液:100mM水溶,同步成虫种群,WMicrotracker Arena设备。
简易操作:
微孔板制备:
按照标准程序制备NGM;
在加入盐和胆固醇后将左旋咪唑立即加入55°C的NGM琼脂溶液中;
左旋咪唑片未接种OP50中;
制备后两周内可使用,保存在4°C的容器中;
测定是在实验开始前已将模板降到室温的板上进行的。
Protocol步骤:
1,在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50);
2,用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,转移到15毫升无菌试管中;
3,让虫子静下来。倒入上清液,注意不要扰乱颗粒;
4,用5ml M9缓冲液进行清洗。短暂摇动或翻转管子;
5,重复上述步骤。倒出上清,加入3ml M9缓冲液;
6,数一式三份,计数每10ul中虫数,计算平均值;
7,制备悬浮液,得到[35虫/10μl];
8,将10 μl虫液转移至6孔板;
9,使用wMicroTracker ARENA观察蠕虫活动;
备注:至少进行3次技术重复,至少进行2次生物重复。
实验结果如图所示:
左旋咪唑对N2运动活性的剂量抑制反应曲线
评价不同浓度左旋咪唑(0µM(对照)、100µM和200µM)的治疗效果。在6孔板中,每孔挑选35个年轻成虫N2。在23℃下记录4小时的运动活动。数据代表四个独立实验的平均值,进行重复实验。
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