如何检测左旋咪唑对NGM系统培养秀丽隐杆线虫的影响
许多胆碱能药物已被用于分析特定的突变体和行为;然而,对秀丽隐杆线虫神经生物学影响最大的两种药物是涕-灭-威和左旋咪唑。使用WMicrotracker SMART,可以很容易地量化乙酰胆碱通道调节剂的作用和动力学,以及其他参与行为的神经元通道。WMicrotracker SMART是我们的新技术,通过它你可以获得小动物种群在时间和空间上的行为的详细信息,包括多蠕虫路径跟踪。下面我们给出一个应用程序示例。
P35中左旋咪唑对秀丽隐杆线虫麻痹的动力学研究
WMicrotracker SMART能够获取并绘制一群蠕虫的路径跟踪,实时计算平均移动速度。左旋咪唑浓度处理(0至200uM)的动力学图如下所示。图中显示了左旋咪唑浓度与运动速度下降的相关性。
利用每小时5分钟的采集延时,WMicrotracker SMART能够量化左旋咪唑麻痹对秀丽隐杆线虫的影响。
Protocol步骤:
1,在NGM培养皿中同步培养日1虫成虫种群(OP50)。
2,用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,并将其转移到无菌2ml微管中。
3,让虫子静下来。倒入上清,注意不要扰乱颗粒;
4,用2ml M9缓冲液进行清洗。短暂摇动或翻转试管;
5,重复上述步骤。把上清倒掉;
6,加入2ml M9缓冲液;
7,计算10µl内的虫数,一式三份,计算平均值;
8,准备悬浮液,得到[25虫/10µl];
9,将10µl蠕虫溶液转移到35mm板上,等到水滴被吸收。
10,5分钟后,在5分钟内使用WMicrotracker SMART注册蠕虫活动。在获取之前,通过对平板进行机械刺激来刺激蠕虫。
微孔板准备:
按照标准程序制备NGM;
在加入盐和胆固醇后立即将左旋咪唑加入55°C的NGM琼脂溶液中;
左旋咪唑板未接种OP50;
测定是在实验开始前已将模板降到室温的板上进行的;
在将蠕虫添加到每个板之前,在每个板的边缘做一个100mm硫酸铜环,以防止蠕虫爬出琼脂;
当添加蠕虫时,要小心不要刮伤琼脂-蠕虫往往会爬进琼脂表面的任何裂缝;
在本实验中,我们观察了左旋咪唑处理在NGM培养基中培养的秀丽隐杆线虫群体中的动力学效应。
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