随着纳米流式分析灵敏度不断提高，以及越来越多的用于外泌体微囊泡（EVs）多参数分析，分析解读由此产生的数据，其标准化和精准度要求也日趋严格。

当前EVs基础研究和转化医学应用不断取得重大突破，EVs分离纯化等样品前处理技术也丰富成熟起来。然而，由于EVs样品本身大小（多数<300nm）和形态组成等原因，目前一般获取的EVs样品仍很难排除类似大小和密度的脂蛋白及蛋白聚集体杂质。此外，日常EVs流式分析更是不可避免的涉及抗体/染料标记，以此表征脂膜，核酸和蛋白等标记物。因此，有效识别和去除外EVs样品中的抗体/蛋白聚集体，对精准解析EVs纳米流式数据至关重要。

近日，丹麦奥尔堡大学医院相关研究小组1结合Apogee超灵敏纳米流式分析仪（hFCM），灵活设计实验方案，系统分析了如何有效识别和去除EVs样品中的抗体/蛋白聚集体，包括hFCM分析前，比较不同时间离心法，洗涤过滤法以及过滤法对于去除EVs蛋白聚集体的有效性（图1）。对比发现，过滤法对于去除EVs蛋白聚集体更为有效，并且发现过滤法对于EVs抗体标记功能分析无影响（图2）。同时给出蛋白聚集体，特别是染料标记的抗体，其聚集体对于EVs流式分析实际影响的典型数据（图3）。结合Apogee hFCM，这些注重细节优化的新成果对EVs多参数纳米流式精准分析更具应用参考价值。

Apogee超灵敏纳米流式分析仪，专为小颗粒分析优化设计，在EVs等小颗粒分析应用工作中，参与发表数百篇文章，其中更是包含大量EVs分析方法优化类文章。自该系统推出以来，在EVs快速多参数精准流式分析方面积累有丰富经验，已成为该分析领域的领导者，备受认可关注。

图1，结合Apogee hFCM，系统分析离心法，洗涤过滤法以及过滤法对于去除EVs蛋白聚集体的有效性

图2，结合Apogee hFCM，分析过滤法去除EVs蛋白聚集体对后续分析的影响

图3，结合Apogee hFCM，包含抗体聚集体的EVs抗体荧光标记典型流式数据

参考资料

Rasmussen R W, Botha J, Prip F, et al. Zoom in on Antibody Aggregates: A Potential Pitfall in the Search of Rare EV Populations[J]. Biomedicines, 2021, 9(2): 206.

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