流式细胞仪以任意单位测量光散射信号，这阻碍了对数据的解释和比较，而这些光散射信号却又包含了关于粒子大小和组成的重要信息。现在这些信息可以通过校准来评估，这意味着将任意单位转换为标准化测量单位，例如以纳米为单位的直径。有一种散射检测器可以通过测量微球并用Mie理论来描述信号，同时考虑流式细胞仪的光学结构和微球的大小和折射率（RIs）来校准。RI是粒子的一种固有特性，它取决于粒子的组成，决定了粒子散射光的效率。当RI已知且散射检测器被校准时，Mie理论可用于推导胞外囊泡（EVs）的直径[1]。在本次讲座中，将解释通过获取侧散射和前向散射信号之间的比率，即流式细胞仪散射光比例分析法（Flow-SR），可以同时测定亚微米颗粒的直径和RI[2]。Flow-SR分析法可以实现对血浆中的EVs（RI<1.42）和脂蛋白颗粒（RI>1.45）进行无标记区分，并可用于评价抗体标记的特异性。我们可自动化Flow-SR分析法，并将其应用于EVs临床研究的数据分析[3]。

[1] De Rond et al. Deriving extracellular vesicle size from scatter intensities measured by flow cytometry. Curr. Protoc. Cytom. e43, 1-14 (2018) 

[2] van der Pol et al. Absolute sizing and label-free identification of extracellular vesicles by flow cytometry. Nanomedicine 14, 801-10 (2018)

[3] Gasecka et al. Ticagrelor attenuates the increase of extracellular vesicles concentrations in plasma after acute myocardial infarction compared to clopidogrel. J. Thromb. Haemost. 18(3), 609-623 (2020)