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    微生物检测中的魔鬼细节,如何优化OD600检测

    OD600用于量化微生物的生长,实时监测细菌、酵母和其他微生物生长,在发酵过程、抗生素敏感性检测和重组蛋白的生产等应用中都至关重要。

    微孔板读板机可使用96 孔板,只需不到200 μL的微生物悬浮液,即可自动测量微生物生长过程,非常适合重复测量多个样品,并比较不同的培养基条件或菌株。

    要获得高质量的OD600数据,获得完美的微生物生长曲线,以下几个条件的优化至关重要。


    1.选择合适的振荡频率:

    振荡可防止微生物沉降到容器底部,同时,摇动频率会影响细胞悬液中营养物质和气体的分布,从而影响生长速率。理想的振荡设置取决于孔体积、板几何形状和微生物的生长要求,因此必须为每个实验优化参数。

    振荡频率对大肠杆菌生长曲线的影响 (A) 基于 100 μL/孔的大肠杆菌生长曲线;(B) 基于 300 μL/孔的大肠杆菌生长曲线。


    2.选择合适振荡模式:

    除了振荡频率外,应用的振荡模式也会对微生物的生长速率产生重大影响。与圆周振荡相比,双圆周振荡更有效地混合微生物悬浮液,OD600值增加更快。

    摇动模式对大肠杆菌生长曲线的影响

     

    3.选择孔扫描来减小数据的变异

    培养基中细胞会不时聚集在一起。这种聚集体会导致OD读数的虚假增加。如果聚集体在下次测量时移动,则测得的 OD 值可能会显著下降,导致曲线上出现尖峰和高的CV。

    而孔扫描通过测量多个点的吸光度,将聚集体的影响分布在更宽的表面积上,从而消除数据波动并提高整体测量的准确性。

    孔扫描对大肠杆菌生长曲线数据变异性的影响。

     

    BMG的Micro-GCM微生物生长曲线监测系统提供从100-1100rpm连续可调的振荡频率,帮助科研人员精细的选择最优化适合不同微生物样本的振荡频率。Micro-GCM还具有双圆周振荡模式,能更有效地混合微生物悬浮液。同时,Micro-GCM还具有孔内多点扫描的读数方法,以减小数据的CV,因而帮助科研人员得到完美的微生物生长曲线数据,获得更准确和可重现的 OD600结果。

     

     

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