​根据美国疾病控制与预防中心(CDC)的数据，在2017年至2020年的250起多州食源性疫情中，沙门氏菌被确定为186例的主要原因。以前的研究发现，多种农业做法是导致沙门氏菌爆发的污染源，包括使用动物粪便作为肥料和被污染的灌溉用水。众所周知，水是新鲜农产品微生物污染的储存库，也是病原体传播的载体。因此，了解水中血清型沙门氏菌的生存能力对减少其致病性传播具有重要意义。

在这项研究中，评估了12种血清型肠沙门氏菌亚种的生存能力。使用纳米流式细胞术（Apogee A50）在RAPID-B（一项专利技术）assay中和TSA (Tryptic Soy Agar)平板分别计数，在4℃和25℃无核酸酶的水中培养160天。结果表明在25°C培养时，在蒸馏水中培养160天后，Apogee纳米流式仪分析所有12种血清型均保持活力，而传统的平板计数未能检测到10种血清型。此外，研究结果表明，4°C构建了一个更有利的环境，沙门氏菌可以在没有营养的情况下长时间存活。然而，在这种条件下，沙门氏菌对所有测试的抗生素和苯扎氯铵 (BZK)表现出更高的敏感性。这项研究提供了沙门氏菌在不同温度下的长期生存能力，并强调需要强大的工具来检测这种微生物，以降低通过无核酸酶的水传播食源性病原体的风险。

通过连续的稀释(100和10 CFU/mL)比较沙门氏菌，评估了纳米流式细胞术检测区分活细胞和死细胞的能力。在无核酸酶的水中，在4℃和25℃下保存150天的悬浮液（图1）。

图1

图1：RAPID-B TPC法活/死细胞流式细胞图:(A)空白;(B)在4°C条件下，稀释10 CFU/mL，第150天;(C)在4°C下，稀释100 CFU/mL，第150天;(D)在25°C条件下，稀释10 CFU/mL，第150天;(E)在25°C下，稀释100 CFU/mL，第150天

为了支持RAPID-B TPC测定，流式细胞术发现在两种温度下，所有沙-门-氏-菌-血清型在水中存活160天后，我们使用UP Broth和1/10 × TSB富集技术进行复苏步骤来评估恢复情况。在25°C保存的沙-门-氏-菌-血清型根据处理表现出不同的恢复模式。事实上，血清型S. Urbana、S. Dublin、S. Kentucky、S. Heidelberg和S. Enteritidis(分别为2、3、6、10和11)在通用预富集(UP)肉汤中没有恢复(图5A)。在4°C下，所有12种血清型在UP肉汤中培养过夜，并由克隆在TSA板上，均显示生长(图5B)。然而，使用富集技术，在4°C条件下，所有沙-门-氏-菌-血清型在TSA板和稀释的TSA板上都恢复良好(图5B,D)。相比之下，在1/10 × TSB中预富集24 h的12种血清型中，有11种在25°C和4°C条件下均在1/10 × TSA板上生长(图5C)。1/10 × TSB未检测鼠-伤-寒-沙-门-氏-菌-。

结论：经RAPID-B流式细胞术分析，沙-门-氏-菌血清型可在无菌无核酸酶的水中存活160天以上。使用RAPID-B TPC检测，在4°C水中保存160天后，分析的沙-门-氏-菌血清型数量减少，但仍高于25°C保存的相同血清型。为了确认，用UP肉汤和1/10×TSB（）预先富集，在TSA（胰蛋白酶大豆琼脂）中复苏了所有筛选的血清型。沙-门-氏-菌-血清型显示出细胞大小的减小，并改变了它们的代谢谱，以便在低营养或无营养的环境中存活更长的时间。在紧张的环境条件下，这种由RAPID-B流式细胞术可以测定的活细胞计数和检测活跃生长的细胞，以及休眠和/或死亡细胞。在未来，RAPID-B基因检测将被开发用于检测特定的沙-门-氏-菌-血清型。

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参考文献
A flow cytometric assay to detectviability and persistence ofSalmonella enterica subspenterica serotypes in nuclease-free water at 4 and25°C
Frontiers in Microbiology，TYPE Original Research
PUBLISHED 16 February 2024Do1 10.3389/fmicb.2024.1342478)Check for updates
OPEN ACCESS
EDITED BYPratik Banerjee,.University of lllinois at Urbana-Champaign.United States
REVIEWED BYMd Latiful Bari,.University of Dhaka, BangladeshAlexey V. Rakov.Central Research Institute of Epidemiology(CRIE), Russia

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