认知功能障碍是一个全球性的健康问题，预计到2050年，痴呆症将影响1.52亿人。痴呆症的风险随着年龄的增长而增加，以及与年龄相关的细胞和分子改变是认知障碍和痴呆症发展的驱动力。

美国研究人员基于神经血管耦合、功能连通性和脑血管内皮细胞外囊泡作为轻度认知障碍的生物标志物研究。本研究使用纳米流式细胞术评估血浆细胞外囊泡(EVs)水平的变化。与CN（对照组）相比，MCI(轻度认知障碍)患者的脑血管内皮EVs (CEEVs)与总内皮EVs的比例增加，这与MCI的结构性MRI(磁共振成像)小血管缺血性损伤有关。NVC（神经与血管的耦合）、CEEVs(脑血管内皮细胞外囊泡)和FC（功能连通性）可以预测MCI的诊断，表明它们有可能作为MCI脑血管病理的标志物。

使用ApogeeFlow Micro-Plus流式细胞仪测量血浆样品中EVs浓度和比例的差异(补充图2A)。每天使用含有二氧化硅和聚苯乙/烯珠的微球(ApogeeMix, cat#: 1527, ApogeeFlow, UK)进行仪器的质量控制(补充图2B)。样品在1.5 μL/min流速下测定120 s。将样品稀释至10,000-20,000事件/s浓度(100- 400倍稀释)。对于每个受试者，在两次单独的测量过程中至少测量了两种不同比例的血浆。为了评估脑血管源性小泡的血浆浓度，排除了血小板(CD41+)和淋巴细胞(CD3+)阴性事件(补充图2C-E)。随后，测定每个测定物双阳性囊泡(内皮和MAL阳性，CD31+/CD105+/CD144+和MAL+)的浓度(事件/μL)。泛内皮标记物阳性表达、CD3和CD41阴性标记、MAL阳性表达(特异性表达于中枢神经系统内皮细胞而非外周内皮细胞)的EVs与CEEVs区别开来。通过内皮和MAL阳性囊泡的数量除以内皮起源囊泡的总数(内皮+/MAL+除以内皮+/MAL+ +内皮+/MAL−)，并以百分比表示，来评估每个等分的血管囊泡与血管囊泡的比例。

补充图.2

补充图2。细胞外囊泡检测和分析。(A)从患者身上采集血液，根据研究方案进行处理，并引用至100µl直到EV测量。制备EV时，将10µl血浆加入80µl 0.22µl滤过的磷酸盐(PBS)中，并用10µl抗体混合液(内皮细胞、血小板和淋巴细胞来源)染色。样品在冰上孵育2小时后，使用apogeflow Micro-Plus流式细胞仪测量EVs的浓度和比例。(B)粒径为80 ~ 1300 nm的二氧化硅和聚苯乙/烯珠。(C-E)门控血浆和淋巴细胞来源的代表性图像。(F, G)排除CD41和CD3后CD31+/ CD105+/CD144+和MAL+细胞外囊泡的散点图。

测定患者血浆中CEEV的比值(%)和血浆浓度(事件/μL)。分析发现，与CN相比，MCI患者血浆中CEEV相对于总内皮囊泡(EEVs)的比例升高， MCI中CEEV浓度升高。

Fig.5

Fig.5。轻度认知障碍(MCI)患者的脑血管内皮细胞外囊泡(CEEVs)增加。年龄匹配对照(CN) (A)和MCI (B) CEEV的散点图。通过内皮和MAL阳性囊泡的数量除以所有内皮源性囊泡(EEV)的数量(内皮+/MAL+除以内皮+/MAL++内皮+/MAL-)并以百分比表示(C)来评估脑血管与其他血管囊泡的比率。图C显示MCI中CEEV%与CN相比显着增加。图D显示，与CN相比，MCI中CEEV浓度(事件/μL)显著增加。图E显示CEEVs在Fazekas评分患者中的分布。CEEV%与WMH负荷增加有显著相关。

结论
本研究发现，与CN相比，MCI部分患者的NVC（神经与血管的耦合）功能障碍和FC降低。这些发现局限于LDLPFC（左侧背外侧前额叶皮层）。探索性研究表明，与CN相比，MCI中CEEVs的比例和浓度升高。CEEVs与MCI患者WMH（保健）负担增加显著相关。通过稳健的模型和特征选择，LDLPFC中的NVC和FC以及CEEVs是预测MCI的最重要变量，具有较高的准确性。这些发现揭示了脑血管血流动力学和功能神经元网络的改变，同时也表明CEEVs是一种潜在的脑血管病理标志物，与MCI参与者的小血管缺血机能密切相关。

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参考文献：
DO1: 10.1002/alz.14072，RESEARCH ARTICLE
Alzheimer' oDementiaTHE JOURNAL OF THE ALZHEIMER'S ASSOCIATION
Neurovascular coupling, functional connectivity, andcerebrovascularendothelialextracellular vesicles asbiomarkers of mild cognitive impairment

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