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浙大医学院脑科学及脑医学院以优化的“Apogee纳米流式测试”以检测星形胶质细胞外泌体为帕金森病病变和诊断作研究

α-突触核蛋白（α-syn）的积累是帕金森病 (Parkinson’s Disease, 简称PD) 发育和进展的重要步骤，不仅在神经元中观察到，而且在神经胶质细胞（包括星形胶质细胞）中也观察到。调节星形胶质细胞α-syn水平和聚集的机制尚不清楚。最近，科研人員已经证明α-syn的一部分扩散是通过细胞外囊泡（EV）发生，尽管目前尚不清楚在PD病变中星形胶质细胞是否参与這过程。然而，众所周知，源自中枢神经系统的EV存在于血液中，并被广泛探索为PD和其他神经退行性疾病的生物标志物。 

在这文章中, 浙大医学院脑科学及脑医学院利用了Apogee纳米流式仪去检测PD病人， 多系统萎缩症 （Multiple System Atrophy， 简称MSA）病人和健康对照組(Healthy Control, 简称HC)的血清样本中的星形胶质细胞衍生的EVs（AEV）水平，以研究AEVs作为诊断PD的生物标志物。研究人员把這优化好的检测方法称为“Apogee assays”。

首先，研究人员先证明“Apogee Assays”针对檢測血清中的AEV的特异性和稳定性。在这次检测中， 研究人员利用GLT-1 (glutamate transporter 1)，总α-syn （SYN211)和聚集体α-syn (MJFR14)作为檢測AEV的标志物。GLT-1标志物会以Alexa Fluor 405荧光标志，从结果中可以看见GLT-1+的EVs可清楚于血清中检测出來，而IgG对照组只有很少量可检测出来(Fig.1a, d)。而SYN211和MJFR14则以Alex Fluor 488标志，检测结果也显示可在血清中可以明显地检测出来，而且比IgG对照组高出很多 (Fig. 1b, c, e, f)。同時，结果也证明GLT-1+，SYN211+和MJFR14+在EV耗盡的血清中的水平明顯地降低了很多 (Fig. 1a-f)，这证明了“Apogee Assays”方法的特異性。最后，研究人员把GLT1，SYN211和MJFR14三个标志物的抗体进行不同浓度的稀释 (Fig. 1g-i)和孵育时间的改变进行測試，说明“Apogee Assays”的方法也有很好的稳定性 (Fig. 1j-l)。

Fig. 1

研究人员利用“Apogee Assays”并对106个PD病人样本，47 MSA病人样本和103个HC样本进行检测。从临床样本检测的结果中，GLT-1+、SYN211+、和MJFR14+在PD病人样本中的水平都比HC和MSA的样本为高。针对样本中带有总α-syn的AEV (GLT-1+/SYN211+)的水平，PD样本明显地比MSA样本和HC样本为高。而带有聚集体α-syn的AEV (GLT-1+/MJFR14+)的水平，在PD和MSA样本中也是明顯地比HC为高 (Fig. 2)。

Fig.2

文章在最后的总结中，指出利用“Apogee Assays”去检测血清中的带有α-syn的AEV水平，可以作为诊断PD的一个有用的生物标志检测方法。

英国Apogee超灵敏纳米流式分析仪，专为外泌体微囊泡（EVs）等小颗粒分析优化设计，在EVs样品颗粒大小分析，绝对定量，多标记物同时快速分析工作中广泛应用。截止目前，该设备已累计参与数百篇高质量同行审议文章相关实验分析工作。其出色的灵敏度，稳定性及可靠性已备受业内广泛认可，并将继续为EVs相关基础研究及转化应用提供坚实支持。

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