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2023-08-11

BMG使用小贴士（二）：闪光次数如何影响测量结果？

对于所有需要光源的检测模式，微孔板读板机通常会显示“闪烁次数”的设置项。这包括荧光强度和吸光度测量。然而，这种设置与发光无关，因为这种类型的测量不需要激发光。

但是闪光次数如何影响测量？在哪些情况下，低闪光次数或高闪光次数有益？

图1：基于荧光的分析的光源和检测系统

你知道吗？
飞行模式是测量微孔板的最快方法。与上面显示的一次闪光测量不同，当载板系统连续运动时，飞行模式每孔闪光一次，最快读板时间只需14秒。

你知道吗？
如果数据点采集之间的时间间隔太短，BMG LABTECH控制软件会将其调整为尽可能小的间隔设置，以适应所选的闪光次数。

您的微孔板读板机将在每次测量中至少用1个闪光激发样本、检测发射光并继续下一个样本。如果您在设置中选择了1个以上的闪光，则检测到的发射光信号为这几次检测的平均值。尽管先进的读板机具有较高的闪光频率，但仪器测量样本所需的时间会随着闪光次数的增加而增加。这也影响了读板所需的总时间，这在以数据点采集之间的最小时间间隔执行快速动力学时尤其关键。因此，在进行动力学实验时，应考虑设定的闪光次数，并将其调整到合适的水平。

图2：闪烁次数对测量时间的影响

本案例将96孔板和384孔板所需的总测量时间与所用闪烁次数进行比较。测量时间随着每次测量使用的闪烁次数而增加，而与使用的微孔板格式无关。然而，在较小的板格式（如384和1536孔板）中有更高数量的测量样本时，总测量时间相对于所用闪烁次数的增加将更明显（例如，96孔中50和200次闪烁之间增加2倍，而384孔板增加3倍）。请注意，测量时间也因读板机型号和制造商而异。

闪光的总次数也会影响光源的激发强度。用于BMG LABTECH微孔板读板机的氙光灯具有非常长的寿命。即使在100000000次闪光之后，它们仍然保持其发射强度的50%。

你知道吗？
BMG LABTECH的线上文档库包含各种各样的应用说明，这些说明不仅突出了我们的微孔板读板机在常用分析上的性能，还提供了读板机设置的建议，例如闪烁次数。

如何调整BMG LABTECH读板机上的闪烁次数？

BMG LABTECH读板机上测试程序的闪烁次数设置可以在“管理程序”选项卡下进行调整。只需打开要修改或创建新程序即可。现在，您可以将“速度和精度”刻度上的滑块移动到三个位置之一（快速、中间和精确）。这样，将自动选择推荐的预设值。或者，点击“高级”按钮手动调整闪烁次数，范围从0到200。

那么，为什么你不能总是使用尽可能少的闪光灯进行测量，并尽可能缩短测量时间呢？答案是，这会影响数据的可变性！微孔板读板机在每次附加闪光之后获取所产生的发射信号。通过多次闪烁检测样本，微孔板读板机可以获得每个数据点的平均值。这提高了数据稳定性，并减少了由每次闪光间变化引起的可变性。特别是，低浓度样品和空白样品受益于更高的闪光次数，因为减少的可变性有助于减少背景噪声（图3）。

图3：荧光基团标准品（0.001至1 nM）相对于所用闪光次数的%CV值

该示例强调了闪光次数对荧光基团标准系列的变异系数（%CV）值的影响。虽然低至0.1nM的高荧光基团浓度的%CV保持在1-2%的低水平，但较低浓度的荧光基团标准样品和空白样品显著变高。通过增加闪烁次数，可以显著降低低浓度标准品和空白品的%CV。使用10-20次或更高的闪光次数可以使得所有测试样品的%CV值降低到约为3%或更低。

通常不建议每次测量都使用尽可能多的闪烁次数（例如200次）。在某一闪光数之后，它只会人为地增加测量时间，而不会进一步提高数据质量。此外，它还会缩短光源的使用寿命。对于许多测定，10-50次闪光就足够了。更高的设置可能有利于特定的应用程序。

结论

为您的分析选择适当数量的闪光次数可确保数据的可靠性和准确性。它不仅有助于保持较低的变异系数（%CV）和标准偏差，而且还可以减少检测时间，同时延长微孔板读板机光源的寿命。

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