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利用高通量荧光DNA/RNA定量分析简化二代测序质量管理
来源: Admin    更新时间: 2018-10-24    浏览: 26 人次

Ulrike Bönisch1, Laura Arrigoni, Diana Santacruz, Nadia Kress

1conceptual design, conduction of experiments, writing of application note

Deep Sequencing Facility, Max Planck Institute of Immunobiology and Epigenetics, Stübeweg 51, Freiburg, 79108, Germany



二代测序(NGS)高速发展应用,在NGS流程中多个步骤都需进行核酸定量对NGS样本进行质量控制(QC),工作量巨大且要求结果精确,传统核酸定量标准方法正面临着巨大的挑战。


核酸定量法主要分为光吸收检测法和荧光检测法。相对光吸收检测法,荧光定量法凭借更高的检测灵敏度(高于光吸收检测法3个数量级),更高的检测特异性(特异性识别双链/单链DNA),目前已成为核酸快速精准定量的首选方法。


针对双链DNA进行少样品量荧光法核酸定量,一直以来常用的方法是:结合Qubit荧光检测仪,使用Qubit荧光染料进行定量。然而这种检测方法,只能单样品依次检测,通量明显受限,并且试剂耗材成本高,显然无法满足高通量的核酸定量检测需求。


对此,德国BMG多功能酶标仪结合Qubit核酸定量荧光染料光谱特征,在BMG荧光检测酶标仪中优化完善光路检测系统,使其核酸荧光定量线性度均可达到R2>0.9999,且均可支持超高灵敏度的核酸定量(线性检测范围50pg/μl-100ng/μl)。同时,BMG这些高性能检测方案,均可在96/384孔板中实现,不仅突破了Qubit检测通量低的限制,并大大降低了试剂耗材成本(Qubit 200μl检测体系VS BMG 96孔板100μl检测体系VS BMG 384孔板20μl检测体系),为高通量,精准,快速,高效,低成本的核酸定量提供了完美的解决方案。


下图为BMG FLUOstar omega多功能酶标仪进行DNA和RNA荧光定量检测与Qubit荧光检测仪检测结果的比对,BMG FLUOstar omega多功能酶标仪在提高检测通量的基础上同时还能对样品进行重复对照检测,更加确保结果的准确,也非常适合低浓度样本的检测。



下图为FLUOstar omega和Qubit荧光检测仪的RNA检测灵敏度比对


目前,该解决方案已在国内外实验室广泛成熟应用起来。如国内NGS企业的典型代表-华大基因,目前已为其全部NGS合作实验室引进了三十多台BMG多功能酶标仪,建立了高通量核酸精准定量的新标准。



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