首页 -> 应用中心 -> 应用案例 -> 应用案例    
 
外泌体微泡非特异性标志物总结分析
来源: Admin    更新时间: 2018-05-23    浏览: 146 人次

外泌体微泡作为细胞间信号传导的重要媒介,越来越多的研究揭示其作为重大疾病生物标志物的临床价值。当前外泌体微泡快速,高通量,多参数的主流分析方法仍为流式分析法。流式分析法主要依赖散射光或者荧光设定分析阈值,划门分析。然而由于外泌体微泡体积远小于细胞,散射光信号弱,传统流式散射光检测灵敏度低,需借助荧光标记才可分析外泌体微泡。其中,非特异荧光标记为外泌体微泡总量分析较为普遍的方法。


近日de Rond等人系统研究适合外泌体微泡非特异标记的理想标志物,详细分析Calcein AM,  Calcein violet,  CFSE,  Di-8-ANEPPS和Lactadherin(另外,因Annexin V和Lactadherin同样结合膜磷脂成分,并且依赖于钙离子,无法适用于血液等样品直接标记,膜磷脂结合效率远低于Lactadherin,故不在此研究范围内)等不同类型标记物。因不同标志物标记外泌体微泡效率明显不同,并且对蛋白质聚集体,脂蛋白,细胞碎片等物质的干扰敏感性不同,其效能比较分析需要非常严格的对比信息方有意义。de Rond等人首次借用Apogee纳米流式超高的散射光灵敏度和分辨率,作为不同标志物标记效能分析的参考标准,结合MCF7细胞上清和血小板外泌体微泡样本,详细比较了上述5种标志物识别外泌体微泡的效能情况。


研究统计发现,Di-8-ANEPPS, Lactadherin和超灵敏散射光可以检测到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌体微泡(图1);Lactadherin和超灵敏散射光可分别检测到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌体微泡(图2)。只有在血小板蛋白质杂志去除后,Di-8-ANEPPS才可以特异识别结合外泌体微泡。Calcein AM,  Calcein violet和 CFSE则是检测灵敏度相对较差或极易引起集群检测问题的标志物。因此,截止目前还没有能够同时满足:标记所有外泌体微泡,特异性足够高,与抗体标记兼容,适用生物体液样本直接标记,标记检测时间低于8小时等条件的非特异标志物。 然而,该研究也反映出针对不同外泌体微泡样品,选择合适的荧光标志物,结合Apogee纳米流式超灵敏散射光,仍会是当前外泌体微泡流式分析的最佳选择,快速,精准,可靠。 


图1,EpCAM+ MCF7 外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析


图2,血小板外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析



Apogee超灵敏纳米流式细胞仪是英国Apogee Flow厂家研发,它独有的专利光学设计使其可检测最小70nm颗粒,10nm分辨率。英国Apogee Flow技术早前广泛为美国军方用于战场上快速微生物检测。继之前北京中科院微生物所和北京计量研究所引入了Apogee流式细胞仪为微生物做快速检测和定量,上海第二军医大学转化医学中心也成功安装了超灵敏Apogee A50-Micro Plus型号来进行外泌体微泡的研究。此外,每年在国际胞外囊泡大会上,更有不少科学家展示的研究成果均采用Apogee超灵敏纳米流式细胞仪来进行胞外囊泡研究。2015年欧洲国家计量研究协会评定英国Apogee超灵敏纳米流式细胞仪为在微泡(<100nm)检测中最灵敏的系统。


参考文献


de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.


欢迎关注伯齐官方微信(微信号:Bio-Gene)

公众号回复:apogee,观看相关技术讲座视频


推荐阅读


>>Apogee纳米流式超灵敏检测干细胞胞外微囊泡

>>Apogee超灵敏纳米流式分析仪在杜邦北京工厂成功安装

>>药企巨人默克引入Apogee纳米流式进行病毒颗粒检测应用

>>Apogee纳米流式应用新亮点-美国FDA推出大肠杆菌单细胞快速检测新方案

>>伯齐科技陈连彬博士喜获细胞外囊泡研究与应用专业委员会任命为委员

>>超灵敏纳米流式技术大力推动阿尔茨海默症和帕金森病的早期诊治

>>Nature子刊发表单个外泌体高通量多参数分析法重磅文章

>>超灵敏纳米流式巧选胞外囊泡最佳参考材料

>>内皮细胞微粒检测解决方案

>>纳米流式技术助力肿瘤靶向递药系统研发

>>间充质干细胞源性胞外囊泡调节免疫功能研究

>>前军用仪器变身前列腺癌检测利器

>>肾结石高通量无创检测新方法:纳米流式分析法





香港伯齐科技有限公司

Bio-Gene Technology Ltd.

广州伯齐生物科技有限公司

400 600 9639

www.bio-gene.com.cn

marketing@bio-gene.com.cn

香港 北京 上海 广州 成都 武汉 济南







 
 
 
分享到:
 

生物器材网      丁香园

  版权所有©1993-2018 香港伯齐科技有限公司  |  企业邮箱登录  |  
香港总公司地址:香港沙田安平街八号伟达中心二十楼十六室    电话:+852-26466101    传真:+852-2686 8806    E-mail:info@bio-gene.com.cn
中国联络点:广州伯齐生物科技有限公司    联系电话:176 2009 3784    E-mail:info@bio-gene.com.cn