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Apogee纳米流式应用新亮点-美国FDA推出大肠杆菌单细胞快速检测新方案
来源: Admin    更新时间: 2017-09-13    浏览: 42 人次


 
空白在食品卫生行业,大肠杆菌早已成为国际公认的卫生监测指示菌。近年来,由于大肠杆菌O157:H7引起的食源性疾病疫情频发,给人类健康带来严重危害,大肠杆菌快速检测技术亟待发展。一般来说, O157:H7感染剂量10个细胞就够了,对于易感人群来说,O157:H7感染剂量细胞数可能会更少。传统平板计数法,通常需要花费几天的时间来检定O157:H7。污染情况。例如,通过使用选择性培养基,抑制背景微生物生长,选择性扩大培养目标菌株,然后通过形态学加以观察检定,检测过程不仅耗费时间长,灵敏度也难以保证,并通常伴有较高的假阴性结果。对此,新的检测技术,如ELISA,PCR,微阵列探针以及流式细胞仪检测法等不断更新改进,特别是流式细胞仪检测法因其操作简单,容易进行快速,多参数的高通量检测,日益备受关注。近日,美国食品和药物管理局(FDA)刊发新文,采用Apogee超灵敏纳米流式分析系统,完善出大肠杆菌单细胞快速精准检测新方案。
空白实验方案采用Apogee超灵敏纳米流式分析系统,使得通常需要几天完成的实验,缩短至9个小时便可完成25个菠菜基质样品的大肠杆菌O157:H7污染情况检测,很好的解决了以往分析耗费时间长的问题;同时,文章对比实验显示:纳米流式分析法可明显提高检测灵敏度:完成大肠杆菌单细胞污染的样品检测,纳米流式分析法比传统检测法灵敏度高出三倍以上(65% vs 20% 阳性复检率)。实验方案列有纳米流式分析的所有准备工作,特别指出如何通过优化过程,省却大量离心和浓缩过程,提高检测效率和分析灵敏度,并且样品制备相关优化过程,均已得到美国FDA专家顾问Thomas Hammack的认可。而整个实验方案的关键技术环节在于,较好地利用Apogee纳米流式分析系统较宽的检测通道避免了背景大颗粒堵塞,省去了样品离心,分离及浓缩的过程,然后结合超高信噪比的散射光和荧光检测灵敏度,以及出厂优化的细菌分析用仪器设定参数,获得对O157:H7单细胞散射光和荧光信号的最佳检测性能(图1),真正意义上为食品卫生行业大肠杆菌单细胞检测建立了省时,省力,灵敏,精确的检测新方案。

 
图 1,左图,高分辨率散射光识别检测大肠杆菌E. coli O157:H7;
右图,特异性荧光染料检测大肠杆菌 E. coli O157:H7
 

参考文献:

Williams A J, Cooper W M, Ramsaroop S, et al. Rapid Flow Cytometry Detection of a Single Viable Escherichia coli O157: H7 Cell in Raw Spinach Using a Simplified Sample Preparation Technique[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8: 1493

 
Apogee超灵敏纳米流式分析仪简介:
超灵敏纳米流式分析仪是英国Apogee Flow厂家研发,它独有的专行光学设计使其可检测最小80nm的小颗粒,并拥有10nm 的分辨率,使其成为市场上唯一可检测小于100nm大小颗粒的流式细胞仪。英国Apogee Flow的技术早前广泛为美国军方用于战场上的快速微生物检测。继之前北京中科院微生物所和北京计量研究所引入了Apogee超灵敏纳米流式分析仪为微生物作快速流式检测和定量,最近上海第二军医大学转化医学中心的老师也选购了Apogee最新的A50-Micro Plus型号来进行外泌体等微颗粒研究的科研工作。而每年在美国举行的国际胞外囊泡大会上,更有不少的科学家的研究中采用了Apogee超灵敏纳米流式分析仪来作胞外囊泡研究。由此可见这种新技术在小颗粒检测中确是带来不少优势

 
 
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