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高通量低体积荧光核酸定量方案
来源: Admin    更新时间: 2016-08-30    浏览: 402 人次


BMG公司CLARIOstar多功能酶标系统优化PicoGreen核酸定量法
 
    对核酸样品的定量是任何基于和分子生物学实验室最基本的需求。除了大家熟知的传统260 /280紫外吸收分析法外,还有很多基于荧光分析的DNA定量方法。这类荧光定量法不仅灵敏度远远高于光吸收法,它们还可以针对双链DNA进行定量。在市场上比较有名的就是Life Technology公司的PicoGreen试剂,它是可跟双链核酸结合的特异性荧光探针。在很多对核酸浓度要求比较高的实验中,如二代测序,经常会用到这种荧光定量方法。
    除了分析灵敏度以及特异性,通量以及微量分析体积也是现有用户经常面对的问题。虽然市面上也有荧光定量仪去配合PicoGreen试剂,但每次只能做一个样本。对于很多服务性企业,特别是测序服务商,每天面对几百个样本,在核酸定量这一环就要花大半天去完成,费时失事。所以市场上非常渴望高通量、低反应体积和高准确度的核酸定量方案。然而,这种新需求对检测设备的要求非常之高。针对这种需求,德国专业酶标仪生产公司BMG LABTECH推出了基于独特的LVF光栅的CLARIOstar多功能酶标仪,并在该系统上优化了 PicoGreen核酸定量方法,是高灵敏度、高特异性、高通量、微体积样品核酸定量的最优解决方案。
    该优化方案分别对BMG公司生产的LVis微量板(2μL体系)、市面上常见的96孔板和384孔板分别进行了测试和优化,并对比了基于CLARIOstar特有的LVF光栅以及优化滤光片两种滤光系统的结果,进一步验证该方案的优越性(图123)。
    所有实验结果数据充分说明,使用CLARIOstar多功能酶标仪进行PicoGreen核酸定量,在超大浓度梯度范围内都有非常好的检测灵敏度和线性度。CLARIOstar独特的LVF光栅具备了与滤光片基本相同的高性能 。例如,在384孔板在,无论是采用滤光片或是采用LVF光栅,其检测最低极限都可以低至3pg/孔。采用基于CLARIOstar多功能酶标仪的PicoGreen核酸定量法,可以进行任意体积核酸样品的精确定量——最低2μL384孔或96孔的标准检测体积。事实上BMG酶标仪的高灵敏度和稳定性已广泛得到国内用户认可,其中国内测序服务龙头—华大基因(BGI),已先后添置十多台BMG系统进行核酸定量检测,充分说明BMG LABTECH多功能酶标仪在高通量核酸定量的优越性与可靠性。
 

1:96孔板PicoGreen分析法,采用滤光片(红色)以及LVF光栅(蓝色)的结果对比图,样品体积200μL,整个检测DNA浓度范围内都有非常好的线性度:滤光片:R2 = 0.9999
LVF光栅:R2 = 0.9998

2:384孔板PicoGreen分析法,采用滤光片(红色)以及LVF光栅(蓝色)的结果对比图,样品体积20μL,整个检测DNA浓度范围内都有非常好的线性度:滤光片:R2 = 0.9999
LVF光栅:R2 = 0.9998
 
3: LVis微量板PicoGreen分析法,采用滤光片(红色)和LVF光栅(蓝色)的结果对比图,样品体积2μL
 
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