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内皮细胞微粒检测解决方案
来源: Admin    更新时间: 2016-08-18    浏览: 315 人次


 
空白在肺小动脉血管重构过程中,凋亡抵抗表型的血管内皮细胞具有高增值活性,其过度增值可促进肺动脉血压升高和右心功能衰竭。这种生理异常,在临床上定义为肺动脉高压(PAH),属于异质衰竭型疾病。
空白血管内皮细胞在维持血管的正常功能方面有着重要的作用。内皮细胞微粒是内皮细胞激活或凋亡时从其表面通过出芽释放的微囊泡(100-1000nm),携带特定的细胞激活,细胞损伤或细胞凋亡相关的生物信息。一系列的研究表明,血管内皮细胞微粒在炎症、血管损伤和血栓形成中发挥着重要的生物学作用,并且在患有心血管疾病、糖尿病和肺部疾病等疾病患者血液中均发现内皮细胞微粒水平有增加,具有作为临床诊断生物标记物的巨大潜力。然而,由于检测技术的限制,使得微粒作为临床诊断生物标记物的发掘工作面临着严峻的挑战。近来,专门针对小颗粒物质分析英国Apogee超灵敏纳米流式分析仪,越来越多的被应用于疾病相关微粒分析过程,为重大疾病早期生物标记物的无创检测发掘工作提供了便利。日前,美国科学家Jonathan A. Rose等人在研究肺动脉高压潜在生物标记物时,将Apogee纳米流式分析系统成功应用于尿液内皮细胞微粒的检测(图1),为临床患者的无创检测奠定了基础。研究发现在肺动脉高压患者尿液中检测到的内皮细胞CD144+微粒含量显著高于正常人(图2A),并且CD144+微粒含量与评估右心室功能的三尖瓣环收缩期位移(TASPE)指标呈正相关(图2B),预示着尿液中的内皮细胞CD144+胞外微粒可以作为肺高压病人右心室功能临床诊断的潜在标记物。
空白Apogee超灵敏纳米流式分析仪,已被欧洲国家计量研究协会评定为检测细胞外微囊泡的最灵敏分析系统。在每年国际胞外微囊泡的研究报告大会上,采用流式分析法分析微囊泡的研究工作,绝大部分都是采用的 Apogee纳米流式分析系统。这主要是由于:它克服了传统流式散射光检测下限的限制(检测下限为500nm,在分析占据微粒绝大部分比例的500nm以下微粒时会受到明显限制),能够检测低至80nm的微粒,同时拥有10nm的超高分辨率。这种技术优势,使得 Apogee超灵敏纳米流式分析不仅只借助散射光就可以精确地分析纳米级的微粒,也可以为荧光标记检测微粒提供必不可少的参考信息。由于细胞外微粒属于膜结构类的囊泡,分析样品中的细胞碎片等杂质将会对荧光标记的特异性产生极大的干扰。荧光标记检测微粒时,若想得到准确的信息,必须借助散射光排除非预期大小的干扰性物质。此外,微粒表面抗原表达丰度和抗原抗体结合效率也会限制微粒的荧光标记检测,这在很大程度上限制了传统流式的微粒检测应用。因此,结合精确的绝对技术能力和专有的折射率校正功能,Apogee超敏纳米流式分析仪已成为纳米级细胞外微粒的最理想分析系统。

1,尿液中内皮细胞微粒的纳米流式检测

A,散射光检测微粒群圈门;图B, Annexin-V+微粒群圈门;图CAnnexin-V+CD144+微粒圈门;图DAnnexin-V荧光染料对照背景圈门;图ECD144荧光染料对照背景圈门;图FCD144抗体同型对照背景圈门。

 

2,肺动脉高压病人内皮细胞CD144+微粒含量高于正常人的含量

APAH病人中CD144+微粒含量显著高于正常人CD144+微粒含量。图BCD144+微粒含量与评估右心室功能的三尖瓣环收缩期位移(TASPE)检测指标呈正相关。

 

参考文献:

Rose J A, Wanner N, Cheong H I, et al. Flow Cytometric Quantification of Peripheral Blood Cell β-Adrenergic Receptor Density and Urinary Endothelial Cell-Derived Microparticles in Pulmonary Arterial Hypertension[J]. PloS one, 2016, 11(6): e0156940.

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